1. 染色后用特定溶液將組織中過多結合的染液脫去，這個過程稱為分化作用，所用溶液稱為分化液。在HE染色種常用低濃度鹽酸作為分化液，因為酸能破壞蘇木素的醌型結構結構，使色素與組織分離而褪色。組織在經蘇木素染色后，必須經過分化去除組織中過多結合及非特異性吸附的染料，才能進行伊紅染色，確保細胞核與胞漿顯色分明。可使用78NB10002蘇木素分化液。分化過程中，根據組織切片厚度、組織類型等結合鏡下觀察適當調整分化時間。

2. HE染色中蘇木素染色后的返藍很重要。蘇木素在酸性條件下為離子狀態，呈紅色；在堿性條件下呈藍色。組織切片經酸性分化液分化后呈紅色或粉紅色，需立即水洗終止分化，再用弱堿性溶液使蘇木素，這個過程就是返藍作用。如果沒有專用的返藍液，用溫水浸洗也能使細胞核返藍，只是所需時間略長。推薦78NB10003蘇木素返藍液。

3. 蘇木素及伊紅染色程度可以根據染色需要進行調整染色時間。

4. 蘇木素染液可重復使用多次，每次用完后需密封保存，防止有效成分揮發。當組織或細胞著色明顯偏淺或顏色異常時請更換新的染液。

5. 用于染色后脫水的無水乙醇純度需大于99.9%。如果乙醇含水，伊紅會褪色導致染色不均勻。

6. 伊紅染液(醇溶)可反復使用數次，當組織著色明顯偏淺時建議更換新的染液。

7. 操作時請穿實驗服，佩戴一次性手套。