選擇處于指數生長期的細胞，按照常規方法收集貼壁細胞或懸浮細胞于離心管中。

1000 rpm-2000 rpm，離心 5 分鐘，收集培養細胞沉淀，棄上清液。

加入適量 4℃預冷的 BIOHUB 無血清細胞凍存液重懸細胞，制成細胞懸液。 （按照細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存液的量，推薦凍存密度：1x10⁶ 至 5x10⁶cells/mL。）

將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，建議每管 1mL 或 1.5mL。

在 15 mL 離心管中加入 5-10 mL 平衡至室溫的wan全培養基。

從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細胞，立即放入 37℃水浴鍋或其他細胞復蘇設備中，迅速解凍。

將凍存管中的細胞懸液逐滴轉移至預先準備好的含wan全培養基的離心管中，1000 rpm-1500 rpm，離心 5 分鐘，收集細胞沉淀，棄上清（操作時小心，切勿將細胞沉淀移去）。

加入適量平衡至室溫的wan全培養基重懸細胞，接種到事先準備好的培養容器中，輕輕搖晃培養容器，使細胞分布均勻。

鏡檢細胞后，可根據各自研究的需要和方法進行細胞常規培養。培養 5-24h 后，觀察細胞狀態，可視情況更換鮮細胞培養液。